简述凯氏定氮法四个步骤

凯氏定氮法的四个步骤是消化、蒸馏、吸收、滴定。

在消化步骤中，需加入少量辛醇并注意控制热源强度；在蒸馏步骤中，清洗仪器后从进样口先加入，然后将吸收液置于冷凝管下端并要求，再从进样口加入20%NaOH至反应管内的溶液有黑色沉淀生成或变成深蓝色，然后通水蒸汽进行蒸馏；蒸馏完毕，再蒸1分钟后，再停火断气。

凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%一19%），因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即：蛋白质含量=含氮量/16%。

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。

凯氏定氮仪的原理和方法如下：

原理：

将有机化合物与硫酸共热使其中的氮转化为硫酸铵。在这一步中，经常会向混合物中加入硫酸钾来提高中间产物的沸点。样本的分析过程的终点很好判断，因为这时混合物会变得无色且透明。

在得到的溶液中加入少量氢氧化钠，然后蒸馏。这一步会将铵盐转化成氨。而总氨量会由反滴定法确定：冷凝管的末端会浸在硼酸溶液中。

方法：

1.开机：连通电源，打开机器右侧电源开关。

2.调试：选择调试进入调试界面，选择碱液阀、碱液泵使碱管路充满液体，选择硼酸泵使硼酸管路充满液体。

3.清洗仪器管路：选择清洗进入清洗界面，选择硼酸管路清洗，对硼酸管路润洗1-2次。

4.空白测试：取20mL蒸馏水，标准酸浓度根据实际标定浓度填写，空白体积为0 ，氢氧化钠溶液体积为0，蛋白系数为1，稀释体积为0。

5.硫酸铵测试：在测试参数输入界面中，样品重量输入称量的硫酸铵重量。

6.样品测定：将样品消化管放在蒸发管处，输入样品重量，空白体积值。